Клонирование и анализ генов легких цепей иммуноглобул-а

Клонирование и анализ генов легких цепей иммуноглобулина стерляди
ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ..............3

ВВЕДЕНИЕ..................................4

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.................5
СТРОЕНИЕ ИММУНОГЛОБУЛИНОВ......................................5
ГЕНОМНАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ И ЭКСПРЕССИЯ
ГЕНОВ L-ЦЕПЕЙ ИГ У МЛЕКОПИТАЮЩИХ...........................7
ГЕНОМНАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ И ЭКСПРЕССИЯ
ГЕНОВ L-ЦЕПЕЙ ИГ У НИЗШИХ ПОЗВОНОЧНЫХ.................11
ЭВОЛЮЦИЯ ГЕНОВ L-ЦЕПЕЙ ИГ........19

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ..........24
ЭЛЕКТРОФОРЕЗ ДНК................24
ВЫДЕЛЕНИЕ ДНК ИЗ ГЕЛЯ.............24
ПОЛУЧЕНИЕ РАДИОАКТИВНЫХ ЗОНДОВ............................25
ВЫДЕЛЕНИЕ ПЛАЗМИДНОЙ ДНК.................................26
ОЧИСТКА ПЛАЗМИДНОЙ ДНК МЕТОДОМ РАВНОВЕСНОГО
ЦЕНТРИФУГИРОВАНИЯ В ГРАДИЕНТЕ ПЛОТНОСТИ CsCl.........26
ТРАНСФОРМАЦИЯ ПРОКАРИОТИЧЕСКИХ КЛЕТОК............27
ВЫДЕЛЕНИЕ ЛЕЙКОЦИТОВ ИЗ КРОВИ РЫБ..........................28
ВЫДЕЛЕНИЕ СУММАРНОЙ РНК ИЗ ЛЕЙКОЦИТОВ............28

ВЫДЕЛЕНИЕ ВЫСОКОМОЛЕКУЛЯРНОЙ ДНК
ИЗ ЭУКАРИОТИЧЕСКИХ КЛЕТОК.............28
КОНСТРУИРОВАНИЕ БИБЛИОТЕКИ кДНК...........................29
ПОЛИМЕРАЗНАЯ ЦЕПНАЯ РЕАКЦИЯ...................................33
СУБКЛОНИРОВАНИЕ ДНК........................34
СКРИНИНГ БИБЛИОТЕКИ кДНК.....................................34
ОПРЕДЕЛЕНИЕ НУКЛЕОТИДНОЙ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ ДНК...................35
САУЗЕРН БЛОТ ГИБРИДИЗАЦИЯ.....................36

РЕЗУЛЬТАТЫ...................................38
КОНСТРУИРОВАНИЕ БИБЛИОТЕКИ кДНК И ЕЕ СКРИНИНГ.................38
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПЕРВИЧНОЙ СТРУКТУРЫ..........................40
СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ ПЕРВИЧНОЙ СТРУКТУРЫ.............................40
АНАЛИЗ ГЕНОМНОЙ ОРГАНИЗАЦИИ..........................................41

ОБСУЖДЕНИЕ.............................46

ВЫВОДЫ..........................48
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ.........................49